油浸物鏡

在試樣和物鏡之間充滿油的物鏡稱為油浸物鏡。用於顯微鏡的油的折射率通常約為1.52,與蓋玻片幾乎相同,但與水和甘油相比是最高的,並且可以獲得更大的數值孔徑。

大的數值孔徑是既增加了分辨能力,但即使有利於當熒光觀察作出貢獻的熒光圖像的亮度,通常油的自發熒光是比水和甘油大,嚴重在條件下需要注意。(最近開發出低自發熒光油,與過去相比有了顯著改善。)

但是,根據使用的條件,可能無法完全證明這些功能。首先,請參考圖2。在觀察狀態,其中所述狀態假設在設計時,當樣品處於接觸以這種方式在玻璃蓋片幾乎完全校正的球面像差,上述“浸沒液體的折射率要觀察高=分辨率小“可以獲得理論結果。而且,即使樣品與蓋玻片分離,如果將其封入香脂或合成樹脂中也沒有問題,所述香脂或合成樹脂具有與固定的顯微鏡固定樣品一樣非常接近玻璃的折射率。

                                                      

                  圖2當樣品與蓋玻片接觸時:油浸物鏡                                                     圖3當樣品遠離蓋玻片時:油浸物鏡

相反,生物樣品*通常在折射率接近水的介質中具有觀察目標,圖3示出在這種狀態下物鏡的第一表面附近的樣品狀態的模型。 。此時,由於水的樣品之間的存在與覆蓋玻璃觀察到的,為1.4基本上NA也油浸物鏡NA減小到1.33,在邊界處的折射,大的球面像差發生我會的。即使水的厚度為約10μm,這也會導致圖像質量的劣化,例如對比度的降低。

** 生物樣品的折射率
細胞折射率≈1.35,培養液的折射率≈1.33

浸水物鏡

水浸物鏡適用於觀察上述活組織切片,培養基中的細胞,厚切片樣品的內部等。

水浸物鏡透鏡,樣品和將其充滿水物鏡之間,所述第一表面附近的樣本目標的光的狀態類似於圖4。與此不同的方式,油浸物鏡,即使在水的蓋玻璃和樣品之間的存在下,它不是球面像差是由引起的。此外,靠近觀察和內部組織切片的情況下,細胞和培養基的水的折射率,球面像差的產生變小。相反,由於在水中浸沒物鏡罩玻璃和水之間的折射率差變大,很容易受到蓋玻璃的厚度誤差。因此,數值孔徑的最顯著目標,校正環由於樣品和上述的水之間的折射率差設置有,不僅覆蓋玻璃的厚度誤差,也糾正的輕微球面像差這是可能的。(有關更多信息,請參閱“蓋玻片和校正環”。)

                                                                     

                                                                                   圖4當樣品遠離蓋玻片時:浸水物鏡

因此,水浸物鏡能夠在不降低最大性能至大約200微米的深度被使用,並充分發揮其能力,尤其是在共聚焦顯微鏡的組合。